二氧化氯是目前国际上公认的第四代安全、高效、广谱、速效的消毒剂，已被世界卫生组织列为A1级消杀菌剂。二氧化氯对细胞壁有较强的吸附穿透力，可有效地氧化细胞内含琉基的酶，还可以快速地抑制微生物蛋白质的合成来破坏微生物。它可以杀灭一切微生物，包括细菌繁殖体、细胞芽孢、真菌、病毒甚至原虫等^[1]。溶液的pH值、浓度、杀菌时间、杀菌温度及有机物含量都将影响二氧化氯溶液的杀菌效果^[2]。低温下，几乎所有消毒剂的消毒效果都会随着温度的降低而显著下降。我国西北地区的季节特征分明，冬季漫长，且温度低。新疆阿拉山口冬季漫长、寒冷，一般气温在-20 ℃左右，为了有效预防在冬季消毒作业中，因二氧化氯消毒剂在低温下变得无杀菌能力或因冻结而无法使用，采用悬液定量杀菌试验法，观察不同的防冻剂的防冻效果及其对二氧化氯消毒剂的杀菌效果的影响，现将结果报告如下。

1  方法

1.1  防冻试验

将不同浓度的受试防冻液分别加入含有效氯100 mg/L，250 mg/L的二氧化氯溶液中。降至实验温度，以防冻液不发生冻结的最低冻剂使用浓度为最佳配比。

1.2  菌片制作

试验菌为枯草杆菌黑色变种（ATCC 9372）芽孢，用磷酸盐缓冲液(PBS)制成菌悬液。取试验菌悬液20 μl滴染于灭菌脱脂白棉布(1 cm×1 cm)上，于37 ℃温箱中烘干30 min，备用。

1.3  中和剂鉴定试验

试验用枯草杆菌黑色变种芽孢菌片，设计6组，按载体定量杀菌试验进行分组实验，结果表明，第一组仅有少数菌生长；第二组菌落数＞100 cuf/片；第3、4、5组细菌数在5×10⁵ ～5 ×10⁶ cuf/片，并且组间菌落数相差不超过10%，第6组无菌生长，判定为所选中和剂有效。试验重复3次。

1.4  悬液定量杀菌试验

采用悬液定量杀菌试验方法，分别在室温和低温两种条件下进行试验。

低温条件下进行杀菌试验时，在无菌试管中加含不结冻的最低浓度的防冻液4.5 ml，预冷至-20 ℃，加菌悬液0.5 ml混匀。作用至规定时间，取0.5 ml此混合液，加入到4.5 ml中和液中，混匀，中和作用10 min，取0.5 ml接种培养，作活菌计数，计算杀灭率。试验重复三次。

常温条件下，将试验浓度的消毒剂4.5ml分装到无菌试管内，置于20±2 ℃水浴恒温，再分别加入试验菌悬液。作用到规定时间，取出0.5 ml混合液加到4.5 ml中和剂试管内，混匀，在20±2 ℃水浴中和作用10 min。取0.5 ml接种于营养琼脂平板，进行菌落计数，计算杀灭率。试验重复三次。

2  结果

2.1  防冻效果试验结果

防冻试验结果表明，-20 ℃时，使用20%氯化钠或10%乙醇可有效降低二氧化氯消毒剂冻结速度。同一温度条件下，防冻液浓度越低的消毒液，结冰速度越快。

2.2  中和剂鉴定试验结果

试验结果表明，二氧化氯消毒液使用0.5%硫代硫酸钠+0.1%吐温80的PBS溶液作为中和剂能有效中和最高试验浓度的残余作用。

2.3  悬液定量杀菌试验结果

2.3.1 -20℃条件下，不加防冻剂的二氧化氯杀菌效果

在-20℃条件下，不使用防冻剂，用含有效氯100 mg/L和250 mg/L的二氧化氯消毒液作用20 min，二氧化氯消毒剂在低温条件下对枯草杆菌黑色变种芽孢的杀菌效果降低。

2.3.2 -20℃条件下，加不同防冻剂的二氧化氯杀菌效果

试验结果表明，在-20 ℃条件下，用10%的乙醇和20%的氯化钠作为防冻剂，在含有效氯100 mg/L和250 mg/L的二氧化氯消毒液作用20 min，加入10%乙醇作为防冻剂的二氧化氯消毒液对枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭率高于20%氯化钠作为防冻剂的二氧化氯消毒液（表2）

2.3.3 室温下，加防冻剂的二氧化氯杀菌效果

室温条件下，在含有效氯100 mg/L、250 mg/L的二氧化氯消毒液中加入10%乙醇、20%氯化钠作用20 min，对枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭率分别为100.00%、99.99%。（表3）

表3 室温下，加防冻剂对二氧化氯杀灭枯草杆菌黑色变种芽孢效果的影响

3  讨论

3.1 一些效果良好的消毒剂在低温条件下杀菌效果都会受到影响，影响二氧化氯溶液杀菌效果的因素多有报道^[2,3]，二氧化氯溶液的杀菌效果，随其pH值下降，浓度增大，温度升高及作用时间延长而提高，随有机物增加而减低^[3]。但都没有使用防冻剂，不加防冻剂含有效氯100 mg/L和250 mg/L的二氧化氯在-20 ℃条件下作用20 min，杀灭枯草杆菌黑色变种芽孢仅为76.11%和89.63%，细菌杀灭率比较低。

3.2 本试验发现，在低温冷冻条件下，不含防冻剂的二氧化氯消毒剂发生冰冻，降低杀菌效果。加入防冻剂后，不影响消毒剂的特性，在低温条件下，这两种防冻剂分别可以与二氧化氯消毒剂混合使用。

3.3 试验证明，乙醇不但防冻效果好，来源广，价格低廉，而且本身具有杀菌效果，作为防冻剂增强了消毒剂的杀菌能力，具有增效作用。可作为消毒用防冻剂首选。野外大面积应用时，也可考虑以氯化钠为防冻剂，杀灭率也可达到标准。

韩露        (新疆九洲熏蒸消毒有限责任公司)

参考文献

[1] 陈建文,蔡晨波.灭菌、消毒与抗菌技术[M].北京,化学工业出版社(第一版).2004.166.

[2] 尤敏，管福来，赵淑梅，等。二氧化氯溶液杀菌影响因素的试验观察[J].潍坊医学院学报. 2002,24(4): 258-259.

[3] 尤敏，管福来，赵淑梅，等。一种二氧化氯溶液杀菌效果及影响因素的试验观察[J].中国消毒学杂志.2003,20(3):203-204